在制药洁净車(chē)间中新(xīn)型过氧乙酸杀芽孢剂的应用(yòng)研究

洁净車(chē)间的主要功能(néng)為(wèi)室内污染控制，在药品、医疗器械生产企业、医院等对污染有(yǒu)非常严格控制要求的领域，洁净車(chē)间发挥了至关重要的作用(yòng)。如果没有(yǒu)洁净車(chē)间，那些对污染敏感的产品不可(kě)能(néng)批量生产，高感染风险的手术也无法实施。洁净車(chē)间一般通过高效空气过滤( HEPA)将空气中的微小(xiǎo)颗粒物(wù)、微生物(wù)过滤掉，為(wèi)室内提供“洁净”的空气，并通过维持室内外一定的压差，使室外洁净级别较低的空气无法轻易进入室内。此外，进出洁净車(chē)间的人员必须严格遵循更衣程序，以避免带入污染。尽管如此，即便是洁净等级最高的洁净車(chē)间，也依然面临微生物(wù)污染的威胁，需要有(yǒu)一套有(yǒu)效的清洁消毒方法来应对微生物(wù)问题…。制药企业在建立清洁消毒方法的时候，都会对如何选择消毒剂、如何正确使用(yòng)消毒剂、如何开展相关验证存在一些疑惑。本丈通过查阅洁净車(chē)间卫生消毒相关的文(wén)献，结合國(guó)内外相关法规要求和杀芽孢剂选择原则，分(fēn)析和介绍了过氧乙酸杀芽孢剂的特点和在制药洁净車(chē)间消毒应用(yòng)中的优势及注意事项等。

1制药企业卫生消毒方案

制药企业所建立的卫生消毒方案中，往往需要轮流使用(yòng)2种以上消毒剂，主要基于以下考虑：

  1)微生物(wù)种类多(duō)、差异大，大部分(fēn)常见的消毒剂并不能(néng)对所有(yǒu)类型微生物(wù)都具有(yǒu)杀灭能(néng)力。尤其是能(néng)生成芽孢的细菌，必须用(yòng)专门的杀芽孢消毒剂（亦称為(wèi)高效消毒剂）才能(néng)彻底杀灭，而常规消毒剂只能(néng)部分(fēn)杀灭其繁殖體(tǐ)，对芽孢是没有(yǒu)效果的：

  2)杀菌能(néng)力强的消毒剂往往使用(yòng)成本相对较高，因此很(hěn)多(duō)生产企业在消毒方案中采用(yòng)一种相对广谱的普通消毒剂用(yòng)于日常消毒（每天或每周使用(yòng)一次），然后用(yòng)杀芽孢剂进行定期清场（每周或每月使用(yòng)一次），这样可(kě)以降低杀芽孢剂的使用(yòng)成本。当然，每个生产企业的环境与工况不可(kě)能(néng)完全相同，因此具體(tǐ)的使用(yòng)频率需要结合环境微生物(wù)监控与鉴定的结果进行分(fēn)析和调整。

  3)无论是美國(guó)、欧盟、还是中國(guó)的GMP法规都要求消毒剂的种类必须多(duō)于一种，目的是降低長(cháng)期使用(yòng)单一消毒剂导致微生物(wù)出现耐药性的风险。尽管微生物(wù)出现耐药性的现象主要是针对抗生素而言，迄今并没有(yǒu)有(yǒu)力的证据表明微生物(wù)对消毒剂也会产生“耐药性”，但作為(wèi)CMP法规的强制性规定，企业是必须遵循的

2消毒剂的类型

  不同类型的消毒剂其杀菌机理(lǐ)、杀菌谱、功效强弱都有(yǒu)差异。有(yǒu)些消毒剂只是起到抑制细菌生長(cháng)的作用(yòng)；有(yǒu)些消毒剂能(néng)够破坏细菌的细胞结构，从而起到杀灭作用(yòng)；而有(yǒu)些消毒剂不仅能(néng)够破坏细胞结构，还能(néng)灭活细菌芽孢。芽孢是洁净車(chē)间内最难以去除的微生物(wù)威胁：芽孢致密的多(duō)肽外壳便其对消毒剂具有(yǒu)极强的抗性，常见的亲水性消毒成分(fēn)很(hěn)难渗入芽孢内部发挥作用(yòng)。芽孢生命力极强，在洁净車(chē)间内干燥、缺乏营养的环境中仍然能(néng)長(cháng)期存活，一旦条件适宜，芽孢就能(néng)重新(xīn)变成细菌繁殖體(tǐ)，给环境、产品造成污染：但需要强调的是，界定“消毒剂”并不需要把能(néng)否杀灭芽孢作為(wèi)标准，因為(wèi)这是更高的要求。一款产品只要能(néng)证明对细菌、真菌或病毒等达到一定的杀灭程度，就可(kě)以被认定為(wèi)消毒剂

 洁净車(chē)间常用(yòng)的消毒剂分(fēn)為(wèi)两大类：一类是非氧化型消毒剂，以醇类、季铵盐类為(wèi)代表；另一类是氧化型消毒剂，如过氧乙酸、二氧化氯、次氯酸盐等。非氧化型消毒剂一般不具备杀灭芽孢的能(néng)力，而氧化型消毒剂中有(yǒu)不少杀芽孢剂。

3杀芽孢剂的选择原则

  杀芽孢剂在杀菌能(néng)力方面无疑是最强效的，但它们也可(kě)能(néng)会给人员健康、使用(yòng)安全带来更多(duō)负面影响，因此必须谨慎选择。以下列举了為(wèi)洁净車(chē)间选择杀芽孢剂时通常需要考虑的方面：

  1)杀菌接触时间越短越好，最好不要超过10min。接触时间是指杀芽孢剂必须保留在消毒表面上的时间，即消毒后至恢复生产前的等待时间。

  2)有(yǒu)些杀芽孢剂对使用(yòng)温度、pH值的范同有(yǒu)要求，如果超过了会影响其杀菌功效    3) GMP法规[2-4]规定周于A、B级洁净車(chē)间内的消毒剂必须是无菌的。如果杀芽孢剂的成分(fēn)在经过伽马射線(xiàn)辐照或除菌过滤后杀菌功效降低较多(duō)的，不宜用(yòng)于A/B级洁净車(chē)间。

  4)有(yǒu)些企业在消毒前会先用(yòng)清洁剂做清洁，由于清洁剂可(kě)能(néng)会影响到后续消毒剂的杀菌功效，因此需要考察杀芽孢剂与所用(yòng)的清洁剂之间的相容性。

  5)尽管没有(yǒu)绝对安全的消毒剂，我们还是应该尽量选择那些对人员、环境相对更安全的产品。

  6)必须重视杀芽孢剂与洁净車(chē)间内各种表面材质的相容性，避免出现材质腐蚀、变色的情况。例如，含氯的杀芽孢剂对不锈钢等材质的影响比较明显，会造成变色、腐蚀等。如果选择此类型的杀芽孢剂，在消毒后注意用(yòng)无菌的水或醇将表面的杀芽孢剂残留擦拭干净。

  7)由于要穿着防护严密的洁净服，人员在洁净車(chē)间内进行消毒并不是一件轻松的工作，因此杀芽孢剂产品的易用(yòng)性也是需要考虑的因素？有(yǒu)些杀芽孢剂使用(yòng)前需要将两种组分(fēn)先混合，混合液一般有(yǒu)效期比较短，不能(néng)继续储存，使用(yòng)起来并不方便。比较理(lǐ)想的方式是同一种杀芽孢剂既有(yǒu)浓缩型（能(néng)够根据需要稀释后用(yòng)于大面积的表面擦拭消毒），又(yòu)有(yǒu)即用(yòng)型（配有(yǒu)喷头，直接对小(xiǎo)面积表面进行喷洒消毒）。

  8)市售的消毒剂产品如果宣称能(néng)杀芽孢的，供应商(shāng)应该能(néng)侈提供测试报告，以证明其对芽孢的杀灭对数值达到官方认可(kě)的标准。

4过氧乙酸杀芽孢剂在制药洁净車(chē)间消毒中的应用(yòng)

  制药企业对洁净車(chē)间内出现芽孢污染都是非常重视的，也是微生物(wù)监控的重点。传统的控制手段是通过甲醛熏蒸、臭氧消毒等空间灭菌的方式来处理(lǐ)，现在也有(yǒu)一些更环保的新(xīn)技术如过氧化氢蒸气灭菌可(kě)以杀灭沽净室内的芽孢。但空间熏蒸的方式毕竟是一剂“猛药”，杀菌的同时也会带来环保、安全与材质腐蚀等问题，并不适于高频使用(yòng)。现在越来越多(duō)的制药企业开始重视通过日常使用(yòng)杀芽孢剂来降低环境中出现芽孢的几率，从而减少对于空间灭菌方式的依赖。常见的杀芽孢剂有(yǒu)次氯酸盐（如84消毒液）、二氧化氯、高浓度的双氧水、过氧乙酸等。其中过氧乙酸在欧洲是杀芽孢剂应用(yòng)的主流趋势，它能(néng)快速杀灭各种类型的微生物(wù)。此外，过氧乙酸杀芽孢剂安全性好、无残留，很(hěn)适合洁净車(chē)间的环境要求。

4.1过氧乙酸杀芽孢剂的特点

  过氧乙酸属于氧化性消毒剂，与传统的氧化性消毒剂次氯酸盐、二氧化氯等含氯杀芽孢剂相比，过氧乙酸是一种新(xīn)型的杀芽孢剂。过氧乙酸由过氧化氢与醋酸反应生成，其溶液中一般都含有(yǒu)过氧乙酸、过氧化氢和醋酸，其中过氧乙酸是主要的杀菌活性成分(fēn)㈣，它通过氧化微生物(wù)外层细胞膜使微生物(wù)快速失去活性，过氧乙酸能(néng)够渗透芽孢的多(duō)肽外壳破坏芽孢内部的大分(fēn)子如糖类、核酸、脂质等，最终造成细胞裂解和死亡。市售的过氧乙酸杀芽孢剂产品中过氧乙酸含量一般為(wèi)5 %—15%。

  过氧乙酸消毒剂非常适合洁净車(chē)间的使用(yòng)环境，主要體(tǐ)现在：

  1)在洁净車(chē)间内室温或低温条件下，过氧乙酸消毒液的活性不会降低。

  2)过氧己酸消毒液与洁净車(chē)间内常见材质的相容性好，对不锈钢不会造成腐蚀。

  3)过氧乙酸的杀菌活性不仅不受有(yǒu)机物(wù)的影响，而且能(néng)有(yǒu)效去除表面的有(yǒu)机物(wù)残留。

  4)过氧乙酸消毒液使用(yòng)安全性好，人员在配制时不需要采取特殊的防护措施，常规穿戴即可(kě)。

  5)过氧乙酸消毒液既有(yǒu)浓缩型产品供稀释用(yòng)于大面积表面消毒，也有(yǒu)稳定的即用(yòng)型产品用(yòng)于小(xiǎo)面积表面消毒。

  6)过氧乙酸可(kě)分(fēn)解挥发，消毒后表面无残留。分(fēn)解产物(wù)為(wèi)水、氧气和二氧化碳，没有(yǒu)有(yǒu)害的分(fēn)解产物(wù)。

  与含氯杀芽孢剂相比较，过氧乙酸杀芽孢剂在材质相容性、残留、稳定性和人员安全性方面均有(yǒu)明显优势，更适合洁净車(chē)间环境使用(yòng)。

4.2过氧乙酸杀芽孢剂在使用(yòng)中的注意事项

  1)过氧乙酸消毒剂其主要活性成分(fēn)过氧乙酸、过氧化氢都存在分(fēn)解的趋势。為(wèi)了尽可(kě)能(néng)延長(cháng)过氧乙酸消毒剂的保质期与使用(yòng)期，制造商(shāng)都会有(yǒu)自己关键的稳定技术。尽管使用(yòng)者很(hěn)难知道稳定技术的细节，但可(kě)以通过产品所宣称的保质期了解其稳定性优劣。例如两种过氧乙酸杀芽孢剂，其活性成分(fēn)浓度相当，其中一种的保质期為(wèi)12个月，另外一种為(wèi)18～24个月，那么显然保质期長(cháng)的产品在使用(yòng)中稳定性会更好一些。此外，有(yǒu)些企业在采購(gòu)过氧乙酸消毒剂后，会通过企业自裣建立内控指标，自检时往往出现过氧乙酸、过氧化氢的含量低于制造商(shāng)所提供的出厂检验值，这也是由于成分(fēn)的分(fēn)解导致的，稳定技术只能(néng)延缓分(fēn)解的速率。一般制造商(shāng)都会提供一个最低有(yǒu)效浓度值，企业自检只要能(néng)高于最低有(yǒu)效浓度值，那么该产品仍在有(yǒu)效期之内。

  2)过氧乙酸消毒液的pH值很(hěn)低，使用(yòng)时应该避免接触铁、锌、铜等软性金属，铝材虽然耐受性要好一些，但也不宜長(cháng)时间接触。

  3)过氧乙酸消毒液分(fēn)解产物(wù)之一為(wèi)醋酸，有(yǒu)刺激性气味，在洁净車(chē)间相对密闭的空间内大量使用(yòng)时可(kě)能(néng)会刺激使用(yòng)人员的呼吸道，因此使用(yòng)人员除了要戴口罩做好自身防护之外，最好能(néng)合理(lǐ)安排消毒區(qū)域，减少连续作业的时间。

  4)过氧乙酸消毒剂能(néng)够快速杀灭芽孢，但是对霉菌的杀灭效果相对要弱一些，往往需要提高使用(yòng)浓度或延長(cháng)接触时间才能(néng)杀灭霉菌。

4.3过氧乙酸杀芽孢剂的相关验证

  消毒剂相关的验证包括杀菌效力验证与清洁验证（残留考察）。杀菌效力验证一般包含实验室杀菌效力测试（悬液法或载體(tǐ)法）、现场考察、日常监控”踟。实验室杀菌测试最好选择载體(tǐ)喷雾杀菌实验，一方面可(kě)以用(yòng)洁净車(chē)间内不同的材质做成载體(tǐ)，考察材质对杀菌效力的影响；另一方面载體(tǐ)喷雾法比悬液法或载體(tǐ)浸泡法更右挑战性，也更贴近于实际使用(yòng)的情况。我國(guó)出版的《消毒技术规范》，《无菌制剂CMP实施指南》中都能(néng)找到相关的实验方法。

  國(guó)外普遍认為(wèi)过氧乙酸杀芽孢剂是无残留的，但國(guó)内制药企业对此比较谨慎。要考察残留，最关键的是建立一种检测限足够低、操作性强的过氧乙酸／过氧化氢残留检测方法。目前有(yǒu)一些商(shāng)用(yòng)检测测试条最低能(néng)检测出0.5 ppm的过氧乙酸／过氧化氢，而且操作性比使用(yòng)HPLC、GC-MS等仪器分(fēn)析手段要简单方便得多(duō)，比较符合制药企业残留检测的要求。

5小(xiǎo)结

  消毒剂对于洁净車(chē)间的微生物(wù)污染控制而言是非常重要的，但如何选择和使用(yòng)好消毒剂并不是简单的事情。定期使用(yòng)杀芽孢剂是洁净車(chē)间消毒计划中一项关键原则。由于过氧乙酸杀芽孢剂具有(yǒu)操作方便、安全性好、无残留、材质相容性好、杀菌效果显著等优点，非常适合制药洁净車(chē)间的消毒使用(yòng)。